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產(chǎn)品名稱：肝癌細(xì)胞
英文簡稱：HEP 3B細(xì)胞

貨號：LZ-X969513
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

載脂蛋白E4抗體晚期糖基化終末產(chǎn)物蛋白對照品乙酰輔酶A（Acetyl-CoA）試劑盒1%亞碲酸溶液

自噬相關(guān)基因AMBRA1抗體內(nèi)皮素-1（蛋白多肽 活性蛋白）線粒體檸檬酸(MCA）含量測試盒4-甲基傘形酮-D-葡萄糖酸苷

磷酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體粘附多肽GRGDS3-磷酸甘油脫氫酶(GAPDH)試劑盒mEC 肉湯      

磷酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體腺苷酸環(huán)化酶激活肽 1-38（全蛋白）酰基轉(zhuǎn)移酶（AAT）測試盒mTSB肉湯

磷酸化凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體髓鞘堿性蛋白(多肽抗原)ADPG焦磷酸化酶(AGP）測試盒新生霉素A

磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體囊素三肽/三肽囊素/雞法氏囊三肽可溶性淀粉合成酶(SSS）測試盒SD-39瓊脂

脊髓小腦失調(diào)癥蛋白1抗體亮抑酶肽結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS）測試盒平板計數(shù)瓊脂（PCA）

磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體促胃泌素釋放肽（抗原）二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶（Rubisco）試劑盒煌綠乳糖膽鹽肉湯 （BGLB）    

磷酸化凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體牛血清白蛋白（標(biāo)準(zhǔn)）線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅴ活性測試盒EC 肉湯      

磷酸化凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體髓鞘堿性蛋白(多肽）大鼠輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒伊紅美藍(lán)瓊脂 (EMB)

磷酸化活化復(fù)制因子2抗體血管活性腸肽乳酸脫氫酶（LDH）測試盒營養(yǎng)肉湯 (NB)   

磷酸化鈉ATP酶蛋白a1抗體神經(jīng)節(jié)肽輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒營養(yǎng)瓊脂 (NA)   

磷酸化鈉ATP酶蛋白a1抗體胰高血糖素樣肽-2蛋白多酚氧化酶(PPO）測試盒乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基     

乙酰輔酶A羧化酶抗體活性依賴的神經(jīng)保護肽(抗原）蛋白質(zhì)羰基測試盒乳糖復(fù)發(fā)酵培養(yǎng)基    

磷酸化乙酰輔酶A羧化酶抗體α-1抗胰糜蛋白酶二氧化酶測試盒去氧膽酸鹽瓊脂     
HEP 3B細(xì)胞小鼠GATA結(jié)合蛋白4一枝黃花（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat

人組織多肽抗原伊貝母(新疆貝母)（標(biāo)準(zhǔn)品）Human, Mouse, Rat

人肺癌標(biāo)志物乙酰丁香酚Human, Mouse

小鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10乙酰杠柳寡糖CHuman, Mouse

大鼠分泌型免疫球蛋白A乙酰哈巴苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat

人胃癌標(biāo)志物乙酰化白藜蘆(標(biāo)準(zhǔn)品)Human, Mouse, Rat

小鼠上皮中性粒活化肽78乙酰黃芪皂苷IHuman, Mouse, Rat

大鼠血紅素氧合酶2乙酰升麻-3-O-α-L-阿拉伯糖苷Human, Mouse, Rat

小鼠氧化低密度脂蛋白抗體乙酰紫草素Human, Mouse, Rat
注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。